د SVAR ژوند ساینس RUO Wieslab تکمیلی سیسټم MBL لاره

مهم معلومات

• انزایم امیونوسای د بشپړونکي فعالیت فعالیت ارزونې لپاره.
• د مایکروټیټریشن پټې (12×8) 96 څاګانې جلا کړئ
• کټ په +2-8 درجو کې ذخیره کړئ
• مثبت کنټرول په -20 ° C ° C کې ذخیره کړئ

د اسنادو شمیره LABEL-DOC-0032، 4.0 د اغیزې نیټه: 03-می-2023

یوازې د څیړنې لپاره کارول.
په تشخیصي پروسیجرونو کې د کارولو لپاره نه.

د څیړنې محصول هدف

د Wieslab® بشپړونکي سیسټم MBL pathway کټ د انسان په سیرم کې د MBL بشپړولو لارې د کیفیت ټاکلو لپاره د انزایم امیونوسای دی، پایله باید د کلینیکي تشخیص یا د ناروغ مدیریت لپاره ونه کارول شي.

بشپړونکي سیسټم په اوږدمهاله، اتوماتیک او ساري ناروغیو کې مهم رول لوبوي. د بشپړولو د فعالولو درې لارې شتون لري (انځر 1)، د بیلګې په توګه کلاسیک، بدیل او په دې وروستیو کې کشف شوي MBL لاره.

ضعیف تکمیلي فعالیت د دې لامل کیږي چې انسانان د تکراري بشپړ یا شدید انتاناتو لپاره حساس شي او ممکن د اتومیمون ناروغۍ پراختیا کې مرسته وکړي. د بشپړونکي نامناسب فعالیت د اوږدمهاله سوزش او نسج زخم کې مرسته کوي.

د Wieslab® تکمیلي ارزونې اصول 

د Wieslab® تکمیلي ارزونه د تکمیلي فعالیت لپاره د هیمولیتیک ارزونې اصول سره یوځای کوي د لیبل شوي انټي باډیز کارولو سره چې د بشپړونکي فعالیت په پایله کې تولید شوي د نیوانټیجن لپاره ځانګړي شوي. د تولید شوي نیوانټیجن مقدار د تکمیلي لارو د فعال فعالیت سره متناسب دی.

د بشپړونکي سیسټم MP کټ کې د مایکروټیټر پټو څاه ګانې د MBL لارې ځانګړي فعالو سره پوښل شوي. د موضوع سیروم د ځانګړي بلاکر لرونکی په ترکیب کې مینځل کیږي ترڅو ډاډ ترلاسه شي چې یوازې د MBL لاره فعاله شوې. په څاګانو کې د ککړ شوي موضوع سیرم د انکیوبیشن په جریان کې، بشپړونکي د ځانګړي کوټ پواسطه فعال کیږي.

بیا څاګانې وینځل کیږي او C5b-9 د یو ځانګړي الکلین فاسفیټس لیبل شوي انټي باډي سره کشف کیږي چې د MAC جوړیدو پرمهال څرګند شوي نیوانټیجن ته.

د مینځلو یو بل ګام وروسته، د ځانګړو انټي باډیز کشف د الکلین فاسفیتس سبسټریټ محلول سره د انکیوبیشن لخوا ترلاسه کیږي. د بشپړولو فعالولو مقدار د رنګ شدت سره تړاو لري او د جذب (نظری کثافت (OD)) له مخې اندازه کیږي.

اخطارونه او احتیاطي تدابیر 

• یوازې د څیړنې لپاره کارول. د تشخیص پروسیجرونو کې د کارولو لپاره نه
• په کټ کې د کنټرولونو په چمتو کولو کې کارول شوي د انسان سیرم اجزا د انسان معافیت ویروس 1 او 2 (HIV 1 او 2) ، هیپاتیت C (HCV) او همدارنګه د FDA لخوا تصویب شوي میتودونو لخوا د هیپاتیت بی سطحي انټيجن لپاره د انټي باډیز شتون لپاره ازمول شوي. او منفي وموندل. ځکه چې د ازموینې هیڅ طریقه نشي کولی بشپړ ډاډ وړاندې کړي چې HIV، HCV، هیپاتیت بی ویروس، یا نور انتاني اجنټان شتون نلري، نمونې او د انسان پر بنسټ ریجنټونه باید داسې اداره شي لکه څنګه چې د ساري ایجنټانو د لیږدولو توان لري.
• د ناروغیو کنټرول او مخنیوي مرکزونو او د روغتیا ملي انسټیټیوټ وړاندیز کړی چې احتمالي ساري ناروغۍ اجنټان د بایوسفټي کچې 2 کې اداره شي.
• ټول حلونه د محافظت په توګه پروکلین 300 لري. هیڅکله د خولې پواسطه پایپټ مه کوئ یا د ریجنټ یا ناروغ ته اجازه مه ورکوئampد پوستکي سره په تماس کې راځي. هغه ریجنټونه چې پروکلین لري ممکن ځورونکي وي. د پوستکي او سترګو سره د تماس څخه ډډه وکړئ. د تماس په صورت کې، د ډیری اوبو سره وینځئ.
• په دې کټ کې د ټولو خطرناکو اجزاو لپاره د موادو خوندیتوب ډیټا شیټونه د سویر لایف ساینس په غوښتنه شتون لري.
  د مینځلو حل (30x Conc.)

 خبرداری

لري

د عکس العمل ډله: 5-chloro-2-methyl-4-isothiazolin-3-one [EC no. 247-500-7] او 2-methyl- 2H-isothiazol-3- یو [EC no. 220-239-6] (3:1)

H317 ممکن د پوټکي حساسیت لامل شي.
H412 د اوږد مهاله اغیزو سره د آبی ژوند ته زیان رسونکی.
P261 د تنفسي سپری څخه ډډه وکړئ.
P273 چاپیریال ته د خوشې کیدو څخه مخنیوی وکړئ.
P280 محافظتي دستکشې واغوندئ.
P333 + P313 که د پوټکي خارښت یا خارش پیښ شي: طبي مشوره / پاملرنه ترلاسه کړئ.
Dilution Buffer MP, Conjugate Solution, Negative Control, Substrate pNPP
EUH208 د عکس العمل ډله لري: 5-chloro-2-methyl-4-isothiazolin-3-one [EC no. 247-500-7] او 2-methyl-2H-isothiazolin-3-one [EC no. 220-239-6] (3:1)" ممکن الرجیک عکس العمل رامینځته کړي.
EUH210: د غوښتنې پراساس د خوندیتوب ډیټا شیټ شتون لري.

د نمونو راټولول 

وینه samples باید د ایسپټیک وینپنکچر تخنیک په کارولو سره راټول شي او د معیاري پروسیجرونو په کارولو سره ترلاسه شوي سیرم. لږترلږه 5 ملی لیتر ټوله وینه سپارښتنه کیږي. اجازه ورکړئ چې وینه د سیروم په نلونو کې د 60-65 دقیقو لپاره د خونې په حرارت (20-25 درجې C) کې بنده شي. سینټرفیوج وینهamples او د حجرو څخه پاک سیرم پاک ټیوب ته لیږدول. سیرا باید په سمه توګه اداره شي ترڅو د ویټرو بشپړولو فعالیت مخه ونیسي. سیرا باید په -70 درجې سانتي ګراد کې کنګل شي یا په کلک ډول تړل شوي ټیوبونو کې د اوږدې ذخیرې لپاره یا په وچه یخ کې د لیږد لپاره. سamples باید له یو ځل څخه زیات کنګل او یخ نه شي. د سیرا کارولو څخه ډډه وکړئ کوم چې icteric، lipemic او hemolized وي. د تودوخې غیر فعال سیرا نشي کارول کیدی. پلازما نشي کارول کیدی. NCCLS د وینې نمونو ذخیره کولو لپاره سپارښتنې وړاندې کوي، (د وینې نمونو د سمبالولو او پروسس کولو لپاره تصویب شوي معیاري پروسیجرونه، H18A، 1990).

د کټ اجزا او د ریجنټونو ذخیره کول

• د کولو سره یو چوکاټurlد جلا کولو څاه ګانې (12×8) د ورق په کڅوړه کې د پاکولو کڅوړې سره مهر شوي. څاګانې د منان سره پوښل شوي دي.
• 35 ملی لیتر Diluent MP (Dil MP)، شنه لیبل شوی.
• 13 mL conjugate چې د الکلین فاسفیټس لیبل شوي انټي باډیز لري چې C5b-9 (نوی رنګ).
• 13 ملی لیتر سبسټریټ محلول د کارولو لپاره چمتو دی.
• 30 ملی لیتر د مینځلو محلول 30x متمرکز.
• 0.2 ملی لیتر منفي کنټرول (NC) چې د انسان سیروم لري (د یوې موضوع سیرم په څیر ضعیف کیږيample).
• 0.2 ملی لیتر مثبت کنټرول (PC) چې یخ شوی وچ انسان سیروم لري، لاندې وګورئ "د مثبت کنټرول بیا رغونه".

په کټ کې ټول ریجنټونه د مینځلو حل او کنټرولونو پرته د کارولو لپاره چمتو دي. reagents باید په کې زیرمه شي 2-8°  د مثبت کنټرول پرته.

مثبت کنټرول باید زیرمه شي -20°C.

توکي یا تجهیزات اړین دي مګر چمتو شوي ندي

• د فلټر 405 nm سره د مایکروپلیټ ریډر.
• دقیق پایپټونه د ضایع کیدو وړ لارښوونو سره.
• د پټو لپاره واشیر، جاذب نسج، ټیوب او ټایمر

کړنلاره

د ازموینې لپاره د اړتیا وړ څاګانو شمیر یوازې لرې کړئ، د المونیم کڅوړه په احتیاط سره بیا تنظیم کړئ. پریږدئ چې ټول حلونه د تحلیل دمخه د خونې د تودوخې (20-25 ° C) سره برابر شي.

د مینځلو محلول چمتو کول

په هغه صورت کې چې د مالګې کرسټالونه د متمرکزو مینځلو محلول سره په شیش کې ولیدل شي، شیش د 37 درجې سانتي ګراد د اوبو حمام کې وساتئ تر هغه چې کرسټالونه د مینځلو محلول له مینځلو دمخه حل شوي وي. د 30x متمرکز واش محلول 30 ملی لیتره په 870 ملی لیترو اوبو کې حل کړئ. کله چې په 2-8 ° C کې زیرمه شي، د مینځلو محلول د کټ پای ته رسیدو نیټې پورې ثبات لري.

د مثبت کنټرول بیا رغونه

په نرمۍ سره ټول لیوفیلیز شوي مواد د شیشې لاندې ته ښکته کړئ او کیپ لرې کړئ. سمدلاسه 200 µL منحل شوي اوبه په مستقیم ډول لیوفیلیز شوي موادو ته اضافه کړئ. کیپ بدل کړئ. شیشې ته اجازه ورکړئ چې د 5 دقیقو لپاره په یخ کې ودریږي او بیا کله ناکله په نرمۍ سره وخورئ یا په بشپړ ډول منحل شي. بیا جوړ شوی کنټرول په ورته ډول د موضوع سیرم په څیر کم کړئample. بیا جوړ شوی کنټرول د کارولو دمخه تر 4 ساعتونو پورې زیرمه کیدی شي که چیرې په 2-8 درجې C یا په یخ کې وساتل شي. دا په -70 ° C کې کنګل کیدی شي او یوځل غوړیدلی شي.

سیروم

منجمد سیرا په لنډه توګه د 37 درجې سانتي ګراد د اوبو حمام کې د نرم مخلوط سره ځای په ځای کړئ. د جزوي تودوخې وروسته سمدلاسه ټیوبونه په یخ حمام کې ځای په ځای کړئ او په یخ کې پریږدئ تر هغه چې په بشپړ ډول غوړ شي. په لنډه توګه د ورټیکس مکسر باندې مخلوط کړئ.

د سیرم کمول

سیرم 1/101 د Diluent MP، شنه لیبل، (500 µL Diluent + 5 µL سیرم) سره کم کړئ. ضعیف شوی سیرم باید د 15 دقیقو لپاره د خونې په حرارت کې د تحلیل څخه دمخه پریښودل شي، مګر د 60 دقیقو څخه زیات نه.

د s incubationamples

پایپټ 100 µL/څاه د ډیاګرام سره سم د هرې لارې لپاره د ډیلیونټ (Dil) په نقل کې د خالي ، مثبت کنټرول (PC) ، منفي کنټرول (NC) او ککړ شوي موضوع سیرم (P) په توګه. د 60-70 دقیقو لپاره په +37ºC کې د پوښ سره مینځل.

مهرباني وکړئ په یاد ولرئ چې هیڅ انکیوبیشن باید د CO2 فضا لاندې ترسره نشي. که د CO2 کابینه کارول کیږي، ډاډ ترلاسه کړئ چې د CO2 اکمالات منقطع/بند شوي دي.

د MBL لاره

	1	2	3
A B C D E F G H	دل MP	P2
	دل MP	P2
	PC	etc
	PC
	NC
	NC
	P1
	P1

د سیرم انکیوبیشن وروسته

څاګانې خالي کړئ او 3 ځله د 300 μL د مینځلو محلول سره وینځئ ، هر ځل څاګانې ډک او خالي کړئ. د وروستي مینځلو وروسته، په جذب شوي نسج باندې د پټې په ټیپ کولو سره څاه خالي کړئ.

conjugate اضافه کول

هر څاه ته 100 µL کنجوجیټ اضافه کړئ. د 30 دقیقو لپاره د خونې د حرارت درجه (+20-25 ° C) کې وینځئ.

د conjugate incubation وروسته
د پخوا په څیر 3 ځله مینځل.

د سبسټریټ حل اضافه کول

په هر څاه کې د 100 μL سبسټریټ محلول اضافه کړئ، د 30 دقیقو لپاره د خونې د حرارت درجه (+20-25 ° C) کې وینځئ. په مایکروپلیټ ریډر کې په 405 nm کې جذب ولولئ. (5 mM EDTA د بند محلول په توګه کارول کیدی شي، 100 μL/څاه. د 60 دقیقو دننه د څاګانو جذب ولولئ.)

د پایلې محاسبه

د NC، PC او s څخه د خالي (Diluent) جذب کم کړئamples. د مثبت کنټرول جذب باید 1> او د منفي کنټرول جذب 0.2 وي. منفي او مثبت کنټرولونه د بشپړونکي فعالیت محاسبه کولو لپاره په نیمه اندازه کارول کیدی شي. د s لپاره د اوسط OD405nm ارزښتونه محاسبه کړئample، PC او NC او د ٪ بشپړونکي فعالیت په لاندې ډول محاسبه کړئ: (Sample-NC)/(PC-NC)x100. منفي او مثبت کنټرولونه د پام وړ ریجنټ ناکامۍ لپاره د څارنې لپاره دي. مثبت کنټرول به د ارزونې کټ آف کې دقیقیت ډاډمن نه کړي. دا سپارښتنه کیږي چې هر لابراتوار خپل د حوالې کچه او د نیمګړتیاو لپاره کم ارزښت رامینځته کړي.
منفي پایله لکه کمښت، باید تل د نوي s ازموینې له لارې تایید شيampد دې لپاره چې ډاډ ترلاسه شي چې د ویټرو بشپړولو هیڅ فعالیت ندی ترسره شوی.

د موضوع پایلې

د بشپړونکي ترتیب په ویټرو کې فعالول د بشپړونکي اجزاو مصرف لامل کیږي چې په پایله کې یې د دوی غلظت کمیږي. په دې توګه، د بشپړونکي پروټین یا بشپړونکي فعالیت تعیین د دې لپاره کارول کیږي چې ایا د تکمیل سیسټم د معافیت او/یا رنځجن میکانیزم لخوا فعال شوی. دواړه فعال او امونو کیمیکل تکمیل اندازه کول د ناروغانو ارزولو لپاره کارول کیږي کله چې د بشپړونکي فعاله ناروغۍ شکمن وي یا د میراثي کمښت امکان وي. د بشپړونکي فعالیت کچه ​​​​د فعاله ارزونو لخوا ارزول کیږي لکه Wieslab® Complement kit د اجزاو ترکیب ، تخریب او مصرف کچه په پام کې نیسي او د امونو کیمیکل میتودونو په مقابل کې د لارې بشپړتیا اندازه چمتو کوي کوم چې په ځانګړي ډول غلظت اندازه کوي. د مختلف تکمیلي اجزاو څخه. کله چې د بشپړونکي اجزاو یا تکمیلي فعالیت کموالی وموندل شي ، کمښت یا روانه ، معافیتي پروسه چې د اجزاو د ماتیدو او د تکمیل کچې د خپګان لامل کیږي د کلینیکانو لخوا په پام کې نیول کیږي. د بشپړونکي کچې زیاتوالی معمولا د حاد مرحلې غبرګون غیر مشخص بیان دی.
د Wieslab® تکمیلی سیسټم MBL Pathway د MBL لارې پورې اړوند د تکمیلي نیمګړتیاو په موندلو کې ګټور کیدی شي لکه څنګه چې په لاندې جدول کې ښودل شوي: د ټولو دریو تکمیلي لارو یوه بشپړه او ژوره فعاله ارزونه ممکن د Wieslab® تکمیل سیسټم سکرین په کارولو سره ترلاسه شي. .

کلاسیک لاره	د MBL لاره	بدیل لاره	احتمالي کمښت
مثبت	مثبت	مثبت	هیڅ نه
منفي	مثبت	مثبت	C1q، C1r، C1s
مثبت	مثبت	منفي	پروپرډین، فکتور B، D
مثبت	منفي	مثبت	MBL, MASP2
منفي	منفي	منفي	C3، C5، C6، C7، C8، C9
منفي	منفي	مثبت	C4، C2 یا ترکیب

د فعالیت ځانګړتیاوې

د وینې ډونرانو څخه 120 سیرا د MP په ارزونه کې ازمول شوي او د نورمال حوالې حد محاسبه شوی. ارزښتونه د مثبت کنټرول په٪ کې څرګند شوي. شکل 1 او جدول 1 وګورئ. په څیړنه کې، 23 samples د 10٪ څخه ښکته وو او دوی د MBL ارزښتونه درلودل (په جلا ارزونه کې تاسیس شوي) د 500 ng/mL څخه ښکته. مهرباني وکړئ په یاد ولرئ چې د ریښتیني نیمګړتیا MP، د بیلګې په توګه د 10٪ څخه کم فعالیت، ممکن په نورمال نفوس کې د 20-30٪ فریکونسۍ کې وموندل شي.

انځور 1.

جدول 1.

	n	منځنی (٪)	±2SD (%)	منځنۍ (٪)
د MBL لاره	120	49	0-125	56

جدول 2

سیرا د پیژندل شوي تکمیلي نیمګړتیاو سره په ارزونه کې ازمول شوي او لاندې پایلې ترلاسه شوې. ټول نیمګړتیاوې په ارزونه کې کشف شوي او ارزښت یې د 5٪ څخه کم دی.

کمښت	C2	C3	C4	C5	C6	C7	C8	C9	H	I
د مضامینو شمیر	11	1	1	2	1	2	2	1	1	2
د نیمګړتیاوو شمیر معلوم شوی	11	1	1	2	1	2	2	1	1	2

جدول 3. د بین الاسایی دقیقیت د دریو ازموینو په واسطه ټاکل شویampپه نقل کې. پایلې د شپږو مختلفو منډو لپاره ترلاسه شوې

Sample	اوسط ارزښت %	SD	CV٪
P1	91	3.3	4
P2	37	4.0	11
P3	16	2.3	15

جدول 4. د انټرا اسیس دقیقیت د یوې ازموینې په واسطه ټاکل شوی وampپه 40 څاګانو کې.

Assay	اوسط ارزښت %	SD	CV٪
MP	74	3.9	5

د ستونزو حل کول

ستونزه	احتمالي لاملونه	د حل لاره
کنټرول ارزښتونه له حد څخه بهر دي	ناسم تودوخه، وخت یا پایپټینګ ریجنټونه نه مخلوط شوي	وګورئ چې وخت او تودوخه سمه وه. تکرار ازموینه.
	د کنټرول کراس ککړتیا	پیپټ په احتیاط سره.
	نظري لاره پاکه نه ده.	په څاګانو کې د کثافاتو یا هوا بلبلونو لپاره وګورئ. د پلیټ لاندې پاک کړئ او بیا یې ولولئ.
	مثبت کنټرول په سمه توګه نه منحل شوی.	مثبت کنټرول وګورئ، منحل کړئ نوی
د ټولو ازموینې پایلې منفي دي	یو یا ډیر ریجنټ نه اضافه شوي، یا په غلط ترتیب کې اضافه شوي.	د بیاکتنې طرزالعمل. د غیر استعمال شوي ریجنټونو لپاره چیک کړئ. تکرار ازموینه.
	د انټيجن لیپت پلیټ غیر فعال.	په غیر استعمال شوي څاګانو کې د څرګند رطوبت لپاره وګورئ. د پلیټ لاندې پاک کړئ او بیا یې ولولئ.
	سیرم غیر فعال.	نوي s کمولamples.
د ازموینې ټولې پایلې ژیړ دي	ککړ شوي بفرونه یا ریجنټ.	د خرابوالي لپاره ټول حلونه چیک کړئ.
	د مینځلو محلول ککړ شوی.	پاک کانټینر وکاروئ. د حل چمتو کولو لپاره کارول شوي اوبو کیفیت وګورئ.
	د سیرم ناسم کمول.	ازموینه تکرار کړئ.
ضعیف دقیقیت	د پایپټ تحویلي CV> 5% یا sampمخلوط نه دی.	د پایپټ اندازه کول چیک کړئ. د تولید وړ تخنیک وکاروئ. د هوایی بلبلونو پایپټ ټپ څخه ډډه وکړئ.
	سیرم یا ریجنټ په کافي اندازه نه مخلوط شوي یا د خونې د تودوخې سره انډول ندي.	ټول ریجنټونه په نرمۍ سره مخلوط کړئ مګر په ښه توګه او د خونې د حرارت درجه سره انډول کړئ.
	د ریجنټ اضافه کول ډیر وخت نیسي، د وخت په وقفو کې تضاد.	ثابت یونیفورم تخنیک رامینځته کړئ او د وخت کمولو لپاره ملټي ټیپ وسیله یا اتومات توزیع وکاروئ.
	نظري لاره پاکه نه ده.	په څاه ګانو کې د هوا بلبلونه چیک کړئ. د پلیټ لاندې پاک کړئ او بیا یې ولولئ.
	مینځل یوشان نه وي، د بلبلونو مینځلو محلول په څاه ګانو کې پاتې کیږي.	وګورئ چې ټول څاه ګانې ډکې شوي او په مساوي ډول تمه کیږي. په څاه کې د ریجنټ له کچې پورته مایع توزیع کړئ. د وروستي مینځلو وروسته، په جاذب نسج باندې د پټې په ټپولو سره څاګانې خالي کړئ.

حوالې

• والپورټ ایم، تکمیل (د دوو برخو لومړۍ) N Engl J Med 2001, 344, 1058-1066.
• والپورټ ایم، تکمیل (د دوو برخو دویمه برخه) N Engl J Med 2001, 344, 1140-1144.
• Roos A، Bouwman L، Munoz J et al. ، د انسان په سیرم کې د بشپړولو د لیکټین لارې فعالیت مشخص کول. Mol Immunol 2003، 39، 655-668.
• Nordin Frediksson G, Truedsson L, Sjöholm A. د ELISA لخوا د بشپړونکي کمښت موندلو لپاره نوې کړنلاره. J Imm میت 1993، 166، 263-270.
• MA Seelen et al، د بشپړونکي سیسټم د کلاسیک، بدیل او MBL لارو فعالیت تحلیل: د ساده ELISA معیاري کول او اعتبار. J Imm میت 2005، 296، 187-198.

د سمبولونو تشریح.

	د تاریخ له مخې کارول.
	بیولوژیکي خطرونه.
	د تودوخې حد
	جوړونکی.
	د بیچ کوډ.
	د کتلاګ شمیره.
	د کارولو لپاره لارښوونې سره مشوره وکړئ.
	خبرتیا.
	د 96 ازموینو لپاره کافي لري.
	انټيجن.
	خړوبونکی.
	ګډول.
	د 30x محلول مینځل.
	سبسټریټ pNPP.
	منفي کنټرول.
	lyophilized مثبت کنټرول.

د پیرودونکي ملاتړ

SVAR د ژوند ساینس AB
Lundavägen 151, SE-212 24 مالمو، سویډن
تلیفون: +46 40 53 76 00
برېښناليک: info@svarlifescience.com
www.svarlifescience.com

اسناد / سرچینې

د SVAR ژوند ساینس RUO Wieslab تکمیلی سیسټم MBL لاره [pdf] لارښوونې RUO، RUO Wieslab تکمیلی سیسټم MBL Pathway، Wieslab Complement System MBL Pathway, Complement System MBL Pathway, System MBL Pathway, MBL Pathway, Pathway

حوالې

• د کارن لارښود